ELISA實驗步驟一覽表
| ? | 間接法（測抗體） | 雙抗體夾心法（測抗原） | 競爭法（測抗原） | 抑制性測定法 |
| 1 | 包被抗原：用包被緩沖液稀釋抗原至最適濃度（5～20μg/ml）各0.3ml加于微反應板每個凹孔中,4℃過夜或37℃水浴2～3小時,貯存冰箱 | 包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度（1～10μg /ml），每凹孔加0.3ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時，貯存冰箱? | ? 同左 | ? 同左 |
| ?2 | ?洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘 | ?同左 | ?同左 | ?同左 |
| ?3 | ?加被檢標本：每凹孔加入用含有0.05%吐溫-20的稀釋緩沖液稀釋的被檢血清各0.2ml，37℃，作用1～2小時 | ?每凹孔加入0.2ml用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標本，37℃作用1～2小時。 | ?分2組,a組加酶標記抗原和被檢抗原混合液0.2ml，另一組只加酶標記抗原液0.2ml，37℃作用1～2小時。（混合液可作成不同稀釋度）。 | ?a組加參考抗體和被檢抗原混合液0.2ml，另一組加參考抗體與等量稀釋劑0.2ml，37℃作用1～2小時。 |
| ?4 | ?洗滌：重復2 | ?同左 | ?洗滌：同左 | ?洗滌 |
| ?5 | ?加入酶結合物：每凹孔加入稀釋緩沖液稀釋的酶結合物0.2ml。37℃作用1～2小時 | ?加入0.2ml用稀釋緩沖液稀釋的酶標記特異性抗體溶液，37℃作用1～2小時或由預試實驗確定作用時間。 | ?—— | ?各加入0.2ml抗參考抗體的酶結合物37℃作用1～2小時。 |
| ?6 | ?洗滌：重復2 | ??同左 | ?—— | ?洗滌 |
| ?7 | ?加入0.2ml底物溶液于每個凹孔,(O.P.D或O.T)，室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4ml底物加0.1ml終止劑）。 | ?同左 | ?同左 | ?同左 |
| ?8 | ?加終止劑：每凹孔加2M H2SO4或2M檸檬酸0.05ml。 | ?同左 | ?同左 | ?同左 |
| ?9 | ?觀察記錄結果：目測或用酶標比色計測定（O.P.D用492nm）O.D值。 | ?同左 | ?用酶標比色計測定a、b兩組O.D值，并求出a、b、O.D值的差數。 | ??同左 |
編輯: ludongcn 作者:博士德
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